南京中医药大学附属昆山中医医院丨葛连启神汤靶向 GPCR 与肠道菌群升高 GLP-1 改善非酒精性脂肪肝的机制研究

研究设计

先构建高脂饮食小鼠 NAFLD 模型，验证不同剂量 GQD 对小鼠肝脂肪变性、糖脂代谢的改善作用并检测 GLP-1 水平及 Gcg 基因表达；再通过 NCI-H716 细胞实验、小鼠急性实验明确 GQD 促进 GLP-1 分泌的分子靶点（苦味受体、TGR5）；利用 UPLC-MS/MS 分析 GQD 的化学成分及回肠分布，筛选出促 GLP-1 分泌的关键活性成分；通过 16S rDNA 测序、代谢组学探究 GQD 对肠道菌群及代谢物的调控，结合粪菌移植实验验证肠道菌群在 GQD 抗 NAFLD 中的介导作用，多维度解析 GQD 的作用机制。

研究结果

GQD 呈剂量依赖性改善高脂饮食小鼠肝脂肪变性、糖耐量异常和血脂升高，减少能量摄入，升高血清 GLP-1 水平并上调结肠 Gcg 基因表达；GQD 可激活肠道内分泌细胞的苦味受体和 TGR5，促进细胞内钙内流进而刺激 GLP-1 分泌，小檗碱、莲心碱等生物碱 / 蒽醌类激活苦味受体，山楂酸、环黄芪醇等三萜类激活 TGR5；GQD 重塑小鼠肠道菌群，升高 Muribaculaceae 和 Akkermansia 丰度，增加乙酸、丙酸等 SCFAs 含量；粪菌移植实验证实肠道菌群可部分介导 GQD 升高 GLP-1、改善 NAFLD 的作用。

Fig1：验证 4 周不同剂量 GQD 干预可改善高脂饮食小鼠的体重增加、糖耐量异常，减轻肝脂肪变性、降低肝脂和血清转氨酶水平，减少小鼠每日热量摄入，同时剂量依赖性升高血清 GLP-1 水平、上调结肠 Gcg 基因表达，证实 GQD 对 NAFLD 的改善作用与 GLP-1 相关。

Fig2：证实单次给予 GQD 可直接升高高脂饮食小鼠血清 GLP-1 水平，且呈剂量依赖性改善小鼠糖耐量，而 GLP1R 抑制剂可逆转 GQD 改善糖耐量的作用，说明 GQD 对糖代谢的改善依赖于 GLP-1 通路。

Fig3：证实 GQD 可促进 NCI-H716 细胞钙内流和 GLP-1 分泌，苦味受体抑制剂、TGR5 抑制剂及对应的基因敲低可阻断该作用，GQD 可直接激活 TGR5，且两种抑制剂能减弱 GQD 在小鼠体内的促 GLP-1 分泌作用，明确 GQD 通过激活苦味受体和 TGR5 促进 GLP-1 分泌。

Fig4：通过 UPLC-MS/MS 获得 GQD 及灌胃后小鼠回肠内容物在正负离子模式下的化学图谱，直观展示 GQD 的化学成分及经胃肠道后在回肠的分布特征，为筛选活性成分提供基础。

Fig5：筛选出 GQD 中可促进 NCI-H716 细胞钙内流和 GLP-1 分泌的关键活性成分，证实生物碱 / 蒽醌类的作用依赖苦味受体、三萜类的作用依赖 TGR5，明确 GQD 促 GLP-1 分泌的物质基础。

Fig6：证实 GQD 可改善高脂饮食小鼠肠道组织形态，逆转肠道菌群失调、降低厚壁菌门 / 拟杆菌门比值，升高 Muribaculaceae 和 Akkermansia 等有益菌丰度，显著增加结肠 SCFAs 含量，对胆汁酸水平无明显影响，揭示 GQD 对肠道菌群及代谢物的调控作用。

Fig7：粪菌移植实验证实，移植 GQD 处理小鼠的粪菌可减轻高脂饮食受体小鼠的体重增加、改善胰岛素抵抗，升高血清 GLP-1 水平，减少肝脂肪堆积、降低血清转氨酶，同时改善肠道组织形态，证明肠道菌群部分介导 GQD 的抗 NAFLD 作用。

Fig8：可视化总结 GQD 改善 NAFLD 的双重机制，即活性成分直接激活小肠 GPCR 促进 GLP-1 分泌，同时调控肠道菌群升高 SCFAs、上调结肠 Gcg 基因表达实现 GLP-1 持续升高，最终通过改善胰岛素敏感性、减少能量摄入缓解 NAFLD。