南京中医药大学附属医院丨牛膝甾酮通过 AMPK 通路调控脂代谢与自噬,改善膝骨关节炎滑膜炎

研究设计

构建 ACLT 诱导的 KOA 大鼠模型并给予不同剂量 CYA 干预，通过组织病理、ELISA、Western blot、q-PCR 评估滑膜炎症与全身炎症水平；采用非靶向代谢组学分析 CYA 对 KOA 代谢谱的影响并聚焦脂代谢；分离培养 FLS，以 LPS 构建炎症模型，检测 CYA 对 FLS 增殖、凋亡的作用；检测 AMPK 通路、脂代谢及自噬相关分子表达，并用 Compound C、3-MA 分别抑制 AMPK 与自噬进行反向验证；通过分子对接、动力学模拟、SPR 明确 CYA 与 AMPK 的结合能力。

研究结果

CYA 可显著减轻 KOA 大鼠滑膜炎症、降低 IL-6、IL-1β、TNF-α 等炎症因子水平，且对主要脏器无明显病理损伤；非靶向代谢组学显示 CYA 可逆转 KOA 的代谢紊乱，显著改善脂代谢失衡；CYA 能抑制 LPS 诱导的 FLS 异常增殖并促进其凋亡；CYA 可激活 AMPK 通路，上调 p-AMPK、p-ACC、CPT1，下调 FASN、SREBP-1、SCD-1，恢复脂代谢稳态，同时提升 GSH、降低 MDA、减少中性脂滴沉积；CYA 通过 AMPK 通路促进 ULK1 磷酸化、上调 LC3B 与 Beclin1、下调 P62，增强自噬体形成与自噬流；Compound C 可逆转 CYA 对脂代谢与炎症的调控作用，3-MA 可逆转 CYA 对自噬、增殖与凋亡的影响；分子实验证实 CYA 与 AMPK 蛋白具有高亲和力。

Fig.1：证明 CYA 能缓解 KOA 大鼠滑膜组织炎症浸润，降低血清及滑膜中促炎因子水平，且使用剂量下生物安全性良好。

Fig.2-3：显示 KOA 模型存在显著代谢紊乱，CYA 可显著纠正代谢异常，核心调控脂代谢相关通路。

Fig.4：证实 CYA 在安全浓度范围内可抑制 FLS 异常增殖、促进 FLS 凋亡，改善滑膜炎关键细胞异常表型。

Fig.5：明确 CYA 可浓度依赖性激活 FLS 中的 AMPK 信号通路，上调 p-AMPK 表达。

Fig.6：证明 CYA 通过激活 AMPK 通路调控 FLS 脂代谢，抑制 AMPK 后该作用完全逆转。

Fig.7-8：证实 CYA 以 AMPK 依赖方式促进 FLS 自噬，提升自噬体形成与自噬流。

Fig.9：表明自噬抑制剂 3-MA 可逆转 CYA 对 FLS 增殖、凋亡的调控作用，自噬是 CYA 发挥效应的关键环节。

Fig.10：验证 CYA 通过激活 AMPK 通路发挥抗炎作用，抑制 AMPK 后抗炎效果消失。

Fig.11：从分子层面证实 CYA 与 AMPK 蛋白存在高亲和力特异性结合，为通路激活提供直接结构依据。