南京中医药大学附属昆山中医医院丨葛连启神汤改善 NAFLD:靶向 GPCR 与肠道菌群升高 GLP-1 的双重机制

研究设计

先建立 HFD 诱导的 C57BL/6J 小鼠 NAFLD 模型，予不同剂量 GQD 及二甲双胍干预，检测体质量、糖脂代谢、肝组织病理等指标明确 GQD 对 NAFLD 的体内改善效应；再通过动物急性实验和 NCI-H716 细胞实验，结合抑制剂、siRNA、双荧光素酶报告实验探究 GQD 促 GLP-1 分泌的作用及苦味受体、TGR5 的介导作用；利用 UPLC-MS/MS 分析 GQD 的化学成分及灌胃后小鼠回肠内容物的成分分布，筛选出促 GLP-1 分泌的活性成分；通过 16S rDNA 测序和靶向代谢组学分析 GQD 对小鼠肠道菌群结构及短链脂肪酸、胆汁酸代谢的调控；最后经 FMT 实验验证肠道菌群在 GQD 升高 GLP-1、改善 NAFLD 中的介导作用，多维度解析 GQD 改善 NAFLD 的分子机制。

研究结果

GQD 呈剂量依赖性改善 HFD 诱导小鼠的肝脂肪变性、糖耐量受损和血脂升高，减少小鼠能量摄入，显著升高血清 GLP-1 水平且其改善糖耐量的效应依赖 GLP-1；GQD 可促进 NCI-H716 细胞内钙内流并释放 GLP-1，该效应由苦味受体和 TGR5 介导，GQD 可直接激活 TGR5，且两种受体的抑制剂能显著减弱 GQD 在体内外的促 GLP-1 分泌作用；从 GQD 中筛选出小檗碱等生物碱、橙黄决明素等蒽醌类可激活苦味受体，山楂酸等三萜类可激活 TGR5，均能促 GLP-1 分泌；GQD 可改善 HFD 小鼠肠道病理结构，降低肠菌厚壁菌门 / 拟杆菌门比值，特异性增加 Muribaculaceae 和 Akkermansia 菌丰度，显著升高结肠短链脂肪酸含量并上调结肠 Gcg 基因表达，对胆汁酸含量影响较小；FMT 实验证实 GQD 处理小鼠的肠道菌群可部分介导 GQD 升高 GLP-1、降低小鼠体质量增加、改善胰岛素抵抗、减轻肝脂肪变性和肝损伤的效应。

Fig1：验证不同剂量 GQD 对 HFD 诱导 NAFLD 小鼠的体内改善效应，明确 GQD 能剂量依赖性减轻小鼠肝脂肪变性、改善糖耐量、降低肝损伤，同时减少能量摄入、升高血清 GLP-1 并上调结肠 Gcg 表达。

Fig2：证实 GQD 可急性升高 HFD 小鼠血清 GLP-1 水平，且其急性改善小鼠糖耐量的作用依赖 GLP-1 的介导。

Fig3：明确 GQD 可促进 NCI-H716 细胞钙内流和 GLP-1 分泌，该作用由苦味受体和 TGR5 介导，且 GQD 能直接激活 TGR5，两种受体的抑制剂可显著减弱 GQD 在体内外的促 GLP-1 分泌效应。

Fig4：获得 GQD 的整体化学轮廓，以及 GQD 灌胃后不同时间点小鼠回肠内容物中的成分分布特征，为后续筛选促 GLP-1 分泌的活性成分提供物质基础。

Fig5：筛选出 GQD 中可促进 NCI-H716 细胞钙内流和 GLP-1 分泌的活性成分，证实生物碱、蒽醌类通过激活苦味受体发挥作用，三萜类通过激活 TGR5 发挥作用。

Fig6：证实 GQD 可改善 HFD 小鼠的肠道组织病理，调节肠道菌群结构并特异性增加有益菌丰度，同时显著升高结肠短链脂肪酸含量，对胆汁酸代谢的调控作用较弱。

Fig7：经粪菌移植实验验证，肠道菌群可部分介导 GQD 升高 GLP-1、改善 NAFLD 小鼠糖脂代谢、减轻肝脂肪变性和肠道病理损伤的效应。

Fig8：可视化总结 GQD 改善 NAFLD 的双重作用机制，直观展示 GQD 通过激活肠道 GPCR 直接促 GLP-1 分泌、调控肠道菌群间接持续升高 GLP-1，最终缓解 NAFLD 的全过程。