IF10.9!南京大学孙洋团队“国自然+共病分析”拿下一区TOP!

• 单细胞RNA测序（scRNA-seq）和T细胞受体（TCR）测序，解析细胞亚群和克隆多样性。

• 流式细胞术和多重免疫荧光，验证细胞比例和空间分布。

• 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞因子（如XCL1）水平。

• 动物模型构建

• C2V7模型：将Ⅱ型胶原蛋白与蛋白聚糖versican衍生肽（VG191–115）混合，单次皮下注射诱导BALB/c和DBA/1小鼠出现AS样症状（附着点炎、异位骨化）。

• 干预实验：使用XCL1中和抗体阻断cDC1的招募，评估对关节炎的缓解效果。

图解摘要

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通过对未治疗的ERA和少关节型JIA患者的外周血和关节液单核细胞进行单细胞测序，团队发现ERA患者关节液中CD8⁺T细胞和中央记忆型CD8⁺T细胞显著富集【图1B】。

TCR测序显示，ERA患者外周与关节液中CD8⁺T细胞存在高度重叠的克隆型，提示存在特异性抗原驱动的免疫应答【图1D, E】。这表明CD8⁺T细胞在ERA发病中起核心作用。

图1.ERA中的滑膜CD8+T细胞表现出增强的活化及克隆性TCR共享

从11,160个树突状细胞中聚类出cDC1、cDC2、pDC和LAMP3⁺DC四类亚群。ERA患者关节液中cDC1比例显著高于OligoA患者【图2C, D】，且流式细胞术进一步证实了这一点【图2E, F】。

转录组分析显示，ERA cDC1高表达MHC I抗原呈递相关基因如HLA-B、TAP1等【图2H】，提示其在抗原交叉呈递中起关键作用。

图2.cDC1s在ERA滑液中选择性富集

配体-受体分析显示，cDC1与CD8⁺T细胞之间通过XCL1-XCR1和CXCL16-CXCR6两条通路相互作用【图3C】。

其中，CD8+ Tcm是XCL1的主要来源【图3D, E】，而cDC1则特异性表达其受体XCR1【图3H】。这形成了一个正反馈环路：cDC1通过MHC I激活CD8+T细胞，活化的T细胞分泌XCL1，进而招募更多cDC1到炎症部位，加剧免疫反应。

ELISA证实ERA关节液中XCL1蛋白水平显著升高【图3F】。免疫荧光进一步显示AS患者脊柱韧带中存在XCR1⁺cDC1与B2M共定位【图3I】，说明该轴在人体病变组织中同样活跃。

图3.ERA滑液中增强的cDC1-CD8+T细胞相互作用

为突破现有模型局限，团队将II型胶原与多功能蛋白聚糖来源多肽VG191–115联合免疫，建立C2V7模型【图4A】。

模型小鼠在免疫后30天出现足肿胀，60天后病理切片显示明显炎细胞浸润、软骨破坏及异位骨化【图4D–G】，Runx2⁺成骨细胞在附着点区域富集【图4H】，成功模拟了AS的核心病理特征，为机制研究和治疗测试提供了理想工具。

图4.单次接种C2V7可在BALB/c和DBA/1小鼠中诱发类强直性脊柱炎（AS）关节炎

流式细胞术显示，在C2V7模型小鼠发炎的关节组织中CD45⁺免疫细胞和CD3⁺T细胞比例显著升高【图5A–D】。CD8+T细胞数量远超CD4+T细胞，并且其中超过80%的CD8+T细胞分泌致炎因子IL-17A【图5J, K】。

同时，cDC1也在滑膜组织中显著富集【图5L, M】。这表明cDC1和IL-17A+CD8+T细胞共同驱动了该模型中的关节炎症和骨损伤。

图5.在C2V7模型的炎症关节中，cDC1s和IL-17A+CD8+T细胞聚集

基于上述发现，为验证cDC1-CD8⁺T细胞轴的治疗潜力，研究者在疾病早期使用中和抗体阻断XCL1【图6B】。结果显示，抗体治疗显著减轻了小鼠的足爪肿胀、关节炎症和免疫细胞浸润【图6C, D】，并减少关节中CD45⁺免疫细胞【图6F, G】、cDC1【图6H, I】及IL-17A⁺ T细胞【图6J, K】的浸润。同时，Runx2⁺成骨细胞在附着点区域明显减少，从而抑制了异位骨化【图6L】，证实阻断该轴可有效抑制炎症与骨化。

图6.XCL1阻断可减轻C2V7模型中的关节炎症和异位骨化