1. 材料与制备
原料:干荷叶;试剂:DSS、美沙拉嗪、ELISA 试剂盒、抗体等
荷叶(LL)提取:粉碎→水煎 2 次→浓缩冻干
荷叶炭(LLC)制备:密闭缺氧、马弗炉450℃煅烧 1h→粉碎→水煎提取→冻干
优化煅烧条件:350/450/550℃,0.5/1/2h,以得率、量子产率、抗氧化为指标
2. 材料表征
形貌:HRTEM、FE‑SEM
结构:UV‑Vis、FT‑IR、XRD、Raman、XPS、1H NMR
光学:荧光光谱、荧光寿命、量子产率(QY)
粒径 / 电位:DLS;稳定性:PBS、模拟胃肠液
3. 体外实验
止血:试管倒置凝血、凝血时间、凝血动力学、血小板计数、凝血四项(PT/APTT/TT/FIB)
抗氧化:DPPH・、ABTS+・、・OH、O₂−・清除率
细胞实验:CCD‑841CoN 细胞;LPS+TNF‑α 构建炎症模型;CCK‑8 测毒性;RT‑qPCR 检测 p‑NF‑κB p65、NLRP3、Caspase‑1、ASC;Western blot 检测焦亡通路
4. 体内实验
动物:C57BL/6 雄性小鼠,DSS 饮水构建 UC 模型
分组:正常组、模型组、美沙拉嗪组、低 / 高剂量 LL 组、低 / 高剂量 LLC 组
给药:第 8–14 天每日灌胃
指标:体重、DAI 评分、脏器指数、结肠长度、CMDI 评分、组织病理学(H&E、PAS)、尾断止血时间与出血量
机制:
炎症 / 氧化:ELISA 测 TNF‑α、IL‑6、IL‑1β、IFN‑γ、IL‑17;ROS、MDA、NO、HYP
焦亡通路:Western blot、免疫荧光(NLRP3、Caspase‑1、GSDMD、ASC)
免疫平衡:流式测脾脏 CD3+/CD4+/CD8+、Th17/Treg
肠道屏障:免疫荧光测 Claudin‑1、Occludin、ZO‑1
肠道菌群:宏基因组测序,α/β 多样性、物种差异分析
5. 统计分析
均值 ±SD,单因素方差分析,Tukey 检验,*P<0.05 为差异显著