IF33.0!南京医科大学王学浩院士凭“国自然”荣登双一区TOP!揭示肝癌靶向治疗新靶点!

• 证实eIF3f在肝癌中高表达，且与预后差直接挂钩。

• 揭示eIF3f通过去泛素化稳定ACSL4蛋白，从而促进脂肪酸合成和肿瘤恶性。

• 发现高脂肪酸会减少CD8+ T细胞浸润，而靶向eIF3f能增强抗PD-1治疗效果。

团队建立了5个病人来源的肝癌类器官，做单细胞测序后计算脂肪酸代谢评分。高低评分组做拟时序分析，找差异基因，再结合TCGA生存数据，最后锁定EIF3F和TMEM14C【图1A-G】。

进一步在90对临床样本和空间转录组中验证，eIF3f在肝癌区域明显高表达，并且差异基因富集在脂代谢通路【图1H-M】。

图1：结合类器官单细胞RNA测序与大数据库分析，筛选在肝细胞癌中同时调控脂肪酸代谢（FAM）与肿瘤恶性表型的关键基因

复现思路：类器官数据不好拿，但TCGA+空间转录组+脂肪酸代谢基因集（MsigDB）完全可以在线做，重点是拟时序和生存筛选的逻辑链。

敲低eIF3f后，类器官和小鼠皮下、原位移植瘤体积和重量显著下降，过表达则相反【图2B-G】。Ki67染色也证实增殖能力被明显改变【图2H】。

尾静脉肺转移模型和生存曲线也一致：敲低组转移少、活得更久【图2L-O】。

图2：eIF3f表达上调在体内、体外实验中促进肝细胞癌恶性进展

复现思路：体内实验不好做，但我们可以用公共数据验证eIF3f与增殖、转移相关基因集的相关性，作为旁证。

代谢组显示，eIF3f过表达组脂质类代谢物显著上调，尤其是棕榈酰辅酶A、硬脂酸等【图3C-E】。

13C-葡萄糖标记实验证实，eIF3f过表达让葡萄糖更高效地转化为长链脂肪酸【图3G-H】。

电镜和Bodipy染色也看到脂滴数量和脂质含量明显增加【图3I-L】。

图3：eIF3f促进肝细胞癌的脂肪酸生物合成（FAB）与胞内脂质蓄积

复现思路：代谢通量不好做，但我们可以用单细胞数据看eIF3f与脂肪酸合成酶（FASN、ACLY等）的共表达。

IP-MS+蛋白组+FAB相关基因集取交集，筛出ACSL4作为候选靶蛋白【图4A-C】。Co-IP、GST pull-down和PLA实验都证实两者直接结合【图4D-J】。

截短体实验锁定eIF3f的MIR区（223-357位）和ACSL4的中央区（238-474位）负责结合【图4K-M】。分子对接和点突变验证了F257、S267、K401等关键结合位点【图4N-O】。

图4：eIF3f可特异性结合脂肪酸合成关键分子ACSL4

复现思路：IP-MS数据没有的话，可以用String或BioGRID预测互作，再用TCGA做eIF3f和ACSL4的表达相关性。

放线菌酮实验显示eIF3f延长ACSL4蛋白半衰期【图5B-C】。MG132可逆转eIF3f敲低导致的ACSL4下降，说明是蛋白酶体途径【图5D】。

eIF3f过表达显著减少ACSL4的K48泛素化，而K48R突变体消除这一效应【图5E-H】。进一步找到eIF3f的MPN结构域中KKV（161-163位）是关键活性位点【图5I-J】。

ACSL4的K148和K536是泛素化的主要修饰位点【图5L-M】。

图5：eIF3f抑制K48位泛素化介导的ACSL4蛋白酶体途径降解

复现思路：泛素化位点可以拿UbiBrowser或GPS-Uber预测，eIF3f的DUB活性可用已知结构域注释推断。

λ-磷酸酶处理后，eIF3f-ACSL4结合显著减弱【图6A】。筛选多个激酶，发现SRPK1敲低降低eIF3f磷酸化水平，并减弱两者结合【图6B-D】。

SPHINX31（SRPK1抑制剂）同样阻断结合【图6E-F】。点突变筛选确认Ser266是eIF3f上受SRPK1磷酸化的关键位点【图6J-N】。

图6：SRPK1介导eIF3f第266位丝氨酸磷酸化，促进eIF3f与ACSL4相互结合

复现思路：磷酸化位点看PhosphoSitePlus，激酶-底物关系可参考Kinase enrichment分析。

免疫缺陷鼠和免疫正常鼠对比发现，敲低eIF3f在免疫正常鼠中抑瘤效果更明显，提示免疫参与【图S21C】。

质谱流式显示，敲低eIF3f后CD8+ T细胞比例上升，IFN-γ和GZMB也升高【图7A-B】。

CD8抗体清除实验逆转了敲低eIF3f的抑瘤效果【图S23】。临床组织芯片也证实eIF3f高表达与CD8+ T细胞和GZMB水平负相关【图7E-F】。

图7：eIF3f高表达与肝细胞癌组织中CD8⁺T细胞浸润减少相关

复现思路：免疫浸润可以直接用TIMER或xCell基于TCGA做，重点看eIF3f和CD8A、GZMB、IFNG的相关性。

用脂质纳米颗粒包裹siEIF3F，能有效递送到肝脏【图8A-B】。单用LNP-siEIF3F或抗PD-1都能抑瘤，但两者联用效果最好，肿瘤体积最小、生存期最长【图8C-F】。

多色免疫组化也证实联合治疗组CD8+ T细胞和GZMB+ CD8+ T细胞比例最高【图8G-I】。

图8：靶向eIF3f可减轻小鼠肿瘤负荷并提升抗PD‑1疗法的抗肿瘤效果

复现思路：这里主要是临床前实验，生信层面可做eIF3f与免疫检查点（PD-1、PD-L1、CTLA4）共表达及预后分层分析。