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南京医科大学博士论文:靶向肝细胞癌特异性分子Glypican-3的抗体类药物开发与功能评价

2026-03-21 23:52:45

研究结论本课题利用噬菌体展示技术筛选获得靶向 GPC3 的 pH 响应性全人源单克隆抗体，为 HCC 的免疫毒素治疗策略的开发及优化提供潜在候选抗体；同时，我们阐明了酸敏感型抗体能够介导免疫毒素快速响应溶酶体降解，表现出高效抗肿瘤效果的作用机制，为依赖于溶酶体降解的抗体偶联物的设计及优化提供理论参考和实验依据。

引言

原发性肝癌是我国第四常见恶性肿瘤及第二肿瘤致死病因，严重威胁人民的生命和健康。据世卫组织统计，全球每年超过70万人死于肝细胞癌，其中约80%的患者来自发展中国家，约50%来自中国。HCC和肝内胆管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）是原发性肝癌的主要类型，其中 HCC 占原发性肝癌的80-90%。肝癌的诱发原因主要包括肝炎病毒感染、食物来源的黄曲霉毒素、酒精性肝病与代谢相关脂肪性肝病等。目前，我国的肝癌病例多起源于慢性炎症性肝病。随着病情进展，患者陆续出现肝脏纤维化，肝硬化，严重影响肝脏功能，相当一部分患者最终发生恶性转化，发生肝脏肿瘤病变。肝细胞癌早期通常没有明显症状，难以发现，大多数患者在初诊时已属于中晚期，不宜采用手术切除治疗，因此此类患者只能以局部治疗和系统治疗为主。

图文结果

图1：32A9 scFv-mPE24 和 42A1 scFv-mPE24 抗肿瘤活性评估。

图2：32A9 scFv-mPE24 和 42A1 scFv-mPE24 行为差异分析

本文小结

1. 建立了 pH 条件性抗体筛选体系，利用噬菌体展示技术获得了两株靶向GPC3 的全人源化抗体 32A9 和 42A1。发现两株抗体均能特异性识别 GPC3 核心蛋白，且具有类似的亲和力和内吞速率；在酸性环境下，32A9 丧失了 GPC3 的结合能力，属于酸敏感型抗体，而 42A1 可持续结合 GPC3，呈现酸耐受性。

2. 建立了抗 GPC3 免疫毒素的生产和评估体系，并验证了基于两株抗体所构

建的免疫毒素对 GPC3 阳性 HCC 肿瘤的杀伤作用。

3. 发现 32A9 scFv-mPE24 和 42A1 scFv-mPE24 免疫毒素体外和体内抗肿瘤活性存在差异，32A9-mPE24 具有更优异的抗肿瘤活性。通过比较 32A9-mPE24和 42A1-mPE24 的抗原结合能力、细胞内蛋白稳定性和游离毒素释放情况发现32A9-mPE24与42A1-mPE24 相比表现出更快的降解速度和更高效的游离毒素释放。发现 32A9-mPE24 对溶酶体酸化更加敏感，在溶酶体中更易失去抗原结合并进行降解，快速生成游离毒素，诱发产生细胞毒性；而 42A1 对酸性环境具有抗性，这使得 42A1-mPE24 在溶酶体中相对稳定，并延迟了游离毒素的释放。