溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）作为炎症性肠病（IBD）的重要亚型，正以逐年攀升的发病率成为全球消化科门诊的“常客”。其典型表现——反复血便、腹痛、体重下降——不仅困扰患者，也令临床医生头痛：现有5-氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂乃至生物制剂虽可缓解症状，却伴随感染、骨髓抑制、肝损伤等棘手副作用，且约三成患者最终仍需切除肠段。更棘手的是，UC发病机制尚未完全厘清，主流观点认为肠道免疫失衡、巨噬细胞过度活化及NLRP3炎症小体“失控”是核心环节。NLRP3炎症小体被危险信号激活后，催化caspase-1自剪切，促成熟IL-1β与IL-18大量释放，引发级联炎症，推动肠黏膜损伤乃至癌变。因此，寻找一条“精准、低毒、可口服”的新干预路径，成为中西医共同关注的焦点。 近年来，可食用植物来源的胞外囊泡样颗粒（EVLPs）因其天然纳米尺寸、低免疫原性、可穿越胃肠屏障等特性，被视作“来自厨房的天然药物”。其中，乌梅（Prunus mume, PM）自古入药，《本草纲目》载其“下气、止痢、安心”，现代研究亦证实其抗氧化、调节胃肠动力之效，但具体物质基础与作用机制始终模糊。南京中医药大学团队首次从青梅中分离出EVLPs，证实其口服即可显著缓解实验性结肠炎，并阐明“miR159-NEK7-NLRP3”这一全新干预轴，为中医药现代化与纳米医学交叉提供了范本。 研究团队借鉴“果汁—差速离心—蔗糖梯度超离”经典方案，从浙江上虞产乌梅中获得直径约124 nm、杯状双层膜结构、ζ电位−27 mV的均一颗粒。纳米跟踪分析显示其粒径分布窄，在模拟胃液、肠液中孵育4 h后仍维持原尺寸，提示可安全通过胃肠极端环境；冷冻电镜下可见典型“茶托”形态，与哺乳动物外泌体高度相似。进一步组分鉴定发现，PM-EVLPs内富集94条植物miRNA，长度20 nt左右，占比最高为miR159、miR396、miR166等；蛋白组学提示其携带的蛋白质多参与“单细胞代谢”“嘌呤核苷酸代谢”；脂质组学则显示二酰甘油、溶血磷脂胆碱及N-花生四烯酸甘氨酸占主导。值得注意的是，PM-EVLPs膜表面缺乏动物外泌体常见CD63、CD81标志，却拥有植物特有的磷脂酸与固醇，为其“跨界”进入哺乳动物细胞提供结构基础。 图2 PM-EVLPs的表征与稳定性
实验采用两种经典模型：C57BL/6雌鼠2.8% DSS自由饮用7 d，以及BALB/c雄鼠2 mg TNBS/40%乙醇灌肠。造模当日即给予PM-EVLPs（0.5或1.5×10¹⁰颗粒/mL，每日灌胃）或阳性对照5-ASA（200 mg/kg）。结果显示，DSS组第8天体重下降约20%，DAI评分高达11，结肠缩短、MPO活性升高、内镜下弥漫性溃疡；而PM-EVLPs高剂量组体重仅下降5%，DAI降至4，结肠长度与MPO均恢复至接近正常，镜下仅见轻度上皮缺损。TNBS模型中，PM-EVLPs更将死亡率由50%拉低至20%，宏观评分、组织学损伤及中性粒细胞浸润显著减轻。安全性评价显示，连续10 d高剂量PM-EVLPs对肝肾功能、主要脏器组织学及外周免疫细胞比例无可见影响，提示其“食疗级”安全边界。 图3 口服PM-EVLPs显著缓解小鼠结肠炎
“口服后能否抵达病灶”是植物EVLPs走向临床的最大疑问。作者用近红外染料DiR标记PM-EVLPs，经口给予健康及DSS结肠炎小鼠，IVIS活体成像显示：健康鼠信号主要聚集于胃与小肠，而结肠炎鼠信号在结肠持续增强，24 h达峰，48 h基本清除；分层切片证实荧光富集于黏膜固有层。进一步分离结肠固有层单细胞，流式结果显示F4/80⁺巨噬细胞中DiR阳性率高达68%，而上皮细胞与T细胞不足10%。体外实验将DiO标记PM-EVLPs与骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）、THP-1巨噬细胞及纯化T细胞共孵育，4 h后巨噬细胞荧光强度分别为T细胞的7.3倍与5.1倍，提示巨噬细胞摄取依赖膜融合或胞饮，而非被动吸附。图4 口服PM-EVLPs可靶向结肠巨噬细胞
为验证“巨噬细胞依赖性”，作者采用氯膦酸二钠脂质体（Clod-Lip）清除巨噬细胞。结果显示，Clod-Lip耗竭90%结肠巨噬细胞后，PM-EVLPs对DSS及TNBS结肠炎的保护效应几乎消失：DAI、结肠长度、MPO、组织学评分均回到模型水平，生存率亦不再改善；而对照空脂质体组PM-EVLPs依然有效。该结果在两种模型、雌雄小鼠中均可重复，排除了性别或种属差异，直接锁定巨噬细胞为PM-EVLPs的“唯一功能靶点”。 图6 巨噬细胞是PM-EVLPs缓解结肠炎的关键细胞
PM-EVLPs选择性抑制结肠巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活 既然锁定巨噬细胞，下一步聚焦其“犯罪工具”——NLRP3炎症小体。Western blot显示，DSS模型结肠巨噬细胞中cleaved caspase-1 p20、成熟IL-1β与IL-18显著升高，而PM-EVLPs使其回归基线；上皮细胞中同一通路却未见明显抑制，提示细胞选择性。体外实验以LPS＋ATP/尼日利亚菌素/单钠尿酸盐（MSU）三种经典方案激活BMDMs与THP-1，PM-EVLPs（1×10⁷、3×10⁷颗粒/mL）剂量依赖地降低caspase-1自剪切及上清IL-1β、IL-18，却不影响细胞活力、增殖或凋亡。更令人振奋的是，AIM2、NLRP1、NLRC4炎症小体激活模型中，PM-EVLPs均“按兵不动”，凸显其对NLRP3的“专一性”。 图7 PM-EVLPs选择性抑制结肠巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活
PM-EVLPs阻断NEK7-NLRP3相互作用，干扰NLRP3炎症小体组装机制层面，PM-EVLPs既不抑制LPS诱导的NF-κB磷酸化，也不干预NLRP3蛋白的转录或降解，提示其作用于“第二信号”。已知NEK7为NLRP3寡聚化与ASC招募的“桥梁”，作者通过免疫共沉淀、邻近连接（PLA）及双分子荧光互补（BiFC）三重技术证实：LPS＋ATP显著增强NEK7-NLRP3结合，而PM-EVLPs使结合信号下降约70%；ASC寡聚化及NLRP3-ASC-pro-caspase-1复合物形成亦被同步阻断。CETSA与SIP实验进一步排除PM-EVLPs直接“抱走”NLRP3蛋白的可能，确认其通过“拆桥”而非“拆楼”策略终止炎症小体组装。 图8 PM-EVLPs阻断NEK7-NLRP3相互作用，干扰NLRP3炎症小体组装
PM-EVLPs中的miR159被鉴定为抑制NLRP3炎症小体活性的关键成分植物EVLPs携带的脂质、蛋白、RNA三大组分，谁是“真英雄”？作者分别用蛋白酶K、氯仿/甲醇抽提及DNase/RNase处理PM-EVLPs，仅RNase处理彻底取消其抑制活性，提示RNA为功能核心。深度测序锁定6条高丰度miRNA，化学合成模拟物逐一验证，仅miR159（40 nM）可重现PM-EVLPs对IL-1β、IL-18的抑制；且其剂量依赖地阻断caspase-1自剪切、ASC寡聚化及NEK7-NLRP3相互作用，而对NF-κB、MAPK磷酸化无影响。反义抑制实验进一步证实，miR159 inhibitor可逆转PM-EVLPs的保护效应，形成“loss-of-function”闭环。图9 PM-EVLPs中的miR159被鉴定为抑制NLRP3炎症小体活性的关键成分
miR159是PM-EVLPs缓解结肠炎的关键成分最终，作者将miR159 agomir（400、800 pmol）口服给予DSS及TNBS小鼠，结果与PM-EVLPs几乎“神同步”：体重下降受限、DAI减半、结肠长度恢复、MPO降低、内镜下黏膜愈合、中性粒细胞浸润减少；TNBS模型死亡率亦由50%降至20%。组织水平证实，miR159 agomir显著抑制结肠巨噬细胞中caspase-1激活及IL-1β分泌，而对上皮细胞无显著影响。至此，一条“口服miR159→靶向巨噬细胞→阻断NEK7-NLRP3→抑制NLRP3炎症小体→缓解结肠炎”的完整分子轴被清晰勾勒。 图10 miR159是PM-EVLPs缓解结肠炎的关键成分
该研究首次把“乌梅-胞外囊泡-miR159”这一传统药食同源物质推向现代纳米医学前沿，其亮点在于：①口服即可精准富集于炎症结肠，突破生物制剂需静脉给药的壁垒；②选择性作用于巨噬细胞，避免广谱免疫抑制带来的感染风险；③以miRNA干预蛋白-蛋白相互作用，为“核酸药物”提供天然载体；④源自食用青梅，安全性高，易于产业化。对中医临床而言，该成果不仅验证了“梅能止痢”的古训，更以现代语言揭示“微观辨证”的新思路——“辨炎症小体之失衡，调miRNA之太过不及”。Lv Q, Yang H, Xie Y, Huang X, Yan Z, Lv Y, Cui Y, Hu L, Qiao H. Prunus mume derived extracellular vesicle-like particles alleviate experimental colitis via disrupting NEK7-NLRP3 interaction and inflammasome activation. J Nanobiotechnology. 2025 Jul 21;23(1):532. doi: 10.1186/s12951-025-03567-9. PMID: 40685348; PMCID: PMC12278495.本文仅用于学术分享，转载请注明出处。若有侵权，请联系微信：bioonSir 删除或修改！点击下方「阅读原文」，前往生物谷官网查询更多生物相关资讯~
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